Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展减慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰脏自身HIV到注意到1标准型心血管疾病诊疗病征的令人满意率在成年人时期就有极好的刻画，多个胰脏自身HIV非典标准型的成年人中都有70%在血浆转换后10年中都患病心血管疾病，而随访15年的成年人这一数量提高到84%。相比较之下，占诊疗1标准型心血管疾病一半以上的标准型1标准型心血管疾病的中风选择性还从未得到更进一步的研究成果。

愈来愈多的人开始运用于分期系统设计来假设1标准型心血管疾病的令人满意：个本体在注意到多种胰脏自身HIV时进入第1过渡阶段，注意到低血糖异常时进入第2过渡阶段，注意到病征时进入第3过渡阶段。一些多发胰脏自身HIV非典标准型的个本体，在1期和2期，令人满意慢，并工业发展为中风的1标准型心血管疾病。我们以后刻画了一三组在首次测定到多种胰脏自身HIV采样后仅仅10年无心血管疾病的却是慢令人满意者，这三组病人人数少，但特质更为说明。随后，我们推测胰脏自身抗原基因表达CD8+T肝细胞催化在令人满意减慢的病人中都大体不依赖于，但在近期中风和长期依赖于的心血管疾病病人中都很容易测定到。这似乎证明，与令人满意病人相比较，这些病人致病催化的缓冲强化。

中期研究成果证明，尽管缓冲性T肝细胞(Treg)数量正常，但心血管疾病病人依赖于一些功能性缺陷，其中都之外对IL-2的催化能力下降。此外，心血管疾病病人中都的畸变CD4+T肝细胞似乎对缓冲更为具抵抗性，平庸为畸变T肝细胞的选择性消散，自然环境消除的Treg和本体外消除的游离Treg，以及抗原经历的CD4+T肝细胞中都IL-2催化消散。本研究成果的用意是刻画了CD4+缓冲性T肝细胞(Treg)在在在却是减慢令人满意者中都的特质，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

步骤：BOX研究成果是一项以成年人相结合的纵向研究成果，在21岁一般而言就诊的病人亲属中都检查1标准型心血管疾病的危险考量。我们以后刻画了长期减慢令人满意者的特质，他们保有多重胰脏自身HIV非典标准型超过10年，但从未注意到心血管疾病的诊疗病征，慢性或非进行时性致病。随后，10名一直保有无心血管疾病并愿意提供大量血液采样的减慢令人满意者不属于T和B肝细胞功能性分析。在目前的研究成果中都，8名慢令人满意者(SP三组)，中都位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身HIV非典标准型。所有的参与者都处于1标准型心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后无法压制了胰脏自身HIV对某些抗原的非典标准型催化，然而，一名病人并未处于2期仅仅6年，但从未注意到诊疗病征，一名病人被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在捕获鉴定采样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该酪氨酸进行时了单独指标。分开外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞妖术和T肝细胞选择性测试指标酪氨酸中都Treg的频序、表标准型和功能性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重归)进行时无指导聚类分析，指标Treg表标准型。

结果：与肥胖酪氨酸相比较，来自慢令人满意本体的清醒CD4+T肝细胞的指导聚类标示出，激能活的清醒CD4+ Treg频序提高，与组胺游离的TNFR相关抗原(GITR)强调提高有关。一名HbA1c上升时的病人与令人满意减慢者和冗余的对照三组相比较，Treg序有所相同。功能性分析证明，与肥胖酪氨酸相比较，来自减慢令人满意本体的Treg选择性的CD4+畸变T肝细胞选择性轻微损坏。平庸为对畸变CD4+T肝细胞CD25和CD134强调的选择性提高。

布1 深入的表标准型分析标示出，CD4+Treg亚标准型在慢令人满意函数调用中都提高。由FlowSOM转化的Treg室，组织起来在来自所有酪氨酸的能活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物强调鉴定出10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;直通程Treg_1;直通程Treg_2;直通程Treg_3;和直通程Treg_4。(a)运用于9个相同Treg记号转化的10个元簇的MST。每个端口代表者一个协同(100个协同)，更为大的元协同(10个元协同)在端口三组周围绘图。每个端口中都的饼布回应单个记号的强调级别。(b)每个元聚类的热布，以标示出整本体记号强调。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)转化布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)比起轻元素为每个metacluster装直通布(轻元素> 0.05%)考虑到为HD和SP三组:直通程Treg_2 (e),直通程Treg_3 (f),直通程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。深蓝色格子代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩鉴定。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 运用于CITRUS的预测模标准型证明，Treg频序的提高是令人满意减慢的标志。基准暂时性(a - f)和葡萄分析(g-k)比较SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团本体的代表者性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时分开，模拟FlowSOM小团本体。(b) HD(环纹)和SP(白斑)三组以及酪氨酸SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的频序汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性同构的装直通布;(c) HLA-DRloGITR−(直通程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(直通程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(直通程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+直通程T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用之间的相同。(j)装直通布标示出了在SP(白斑)和HD(灰点)三组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的比起轻元素(数量)。(k)直方布标示出每个簇的表标准型(粉红色)和Treg记号比起强调与故事情节强调(紫色);上列，直通程Treg_3;后面一行，直通程Treg_4。故事情节与所有其他簇中都记号的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩鉴定

布3 与肥胖献血者相比较，令人满意减慢者清醒treg的GITR提高。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;直通程Treg_2;直通程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个强调记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的强调热布(sp606不之外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR强调结合，标示出直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon筛选符号秩和鉴定，p< 0.07(深蓝色)所有酪氨酸之外，p< 0.05(紫色)酪氨酸SP 606和冗余的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR强调，从基准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)结合，标示出直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩鉴定

布4 来自减慢令人满意的CD4+ treg肝细胞压制畸变CD4+T肝细胞的能力下降。SP三组用紫色的直通和格子回应，HD三组用黑色的直通和格子回应，深蓝色的直通/格子回应酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按通过观察的数量催化物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培育出3天后进行时流式肝细胞妖术测定。(a-d)与CD4+；也者比起应的treg培育出(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育出。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE选择性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百份。运用于非典标准型对照(激能活的响应肝细胞不含treg)计算选择性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 畸变CD4+T肝细胞对减慢令人满意的T肝细胞酪氨酸的选择性更为适合于。SP三组用紫色的直通和格子回应，HD三组用黑色的直通和格子回应，深蓝色的直通/格子回应酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞进行时分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按通过观察的数量催化物。用抗CD3 /28微珠酪氨酸肝细胞，培育出3天后进行时流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝蛋白酶分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协力培育出。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE选择性前年(b)。(c,d) CD25选择性前年(c)和CD134选择性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们给出的论据是，来自减慢令人满意子的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR强调中都得到了扩展和丰富，强调了实质性研究成果Treg在1标准型心血管疾病似乎性个本体中都的关联性的更为进一步。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28